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    微生物检测中培养基的质量控制

    提供者:上海喆图科学仪器有限公司   发布时间:2019/4/4  阅读次数:85次   进入该公司展台

     培养基的购置与验收

     

    1.购置

      从培养基自身的质量来看,不同生产厂家的产品,甚至同一厂家不同批号的产品都会存在差异。依据ISO/IEC17025《检测和校准实验室能力的通用要求》,对培养基的供应企?#21040;?#34892;评价后选择?#32454;?#30340;供应商,这是培养基购买过程中重要的步骤。应选择产品市场信誉度高、有质量保证能力和服务保证能力的企业;企业是否通过了质量管理体系的认证是较为客观的评价指标。要求生产企业提供:培养基成分名称及产品编号、批号、使用前的pH、储藏信息和?#34892;?#26399;、?#38405;?#35780;价?#36864;?#29992;测试菌株、技术数据清单、质控证书以及必要的安全/危害数据等材料。

    2.验收

      购买的培养基?#20132;?#21518;,应有专人做好接受和验收工作,应仔细核对生产企业提供的资料、培养基名称、规格数量、外观特征、批号、保质期是否符合要求。每批培养基?#20132;?#29289;后?#21152;?#23545;培养基的质量进行检测,满足检测方法规定的要求后方可投入使用。

     

    培养基的储存

     

      干粉培养基应保存在阴凉干燥处,要避免阳光直射;未开瓶的培养基在室温下的最长保存2年,开瓶后的干粉培养基易吸湿,应注意防潮并在6个月内用完。应定期对储存中的培养基进行常规检查,如容器密?#25307;?#22797;查、首次开封日期、内容物的感官检查,如果培养基发生结块、颜色异常和其他变质迹象就不能再使用。

     

    培养基的制备

     

    1.培养基用水

      培养基制备用水应使用电阻率不小于30万Ωcm的蒸馏水或与其同质的水,不建议使用离子交换器生产的去离子水。

    2.称量

      称量时要用专用的角匙,避免交叉污染而影响检验结果;干粉培养基易吸?#20445;?#22914;有条件,尽量在湿度?#31995;?#30340;房间称取培养基。

    3.复水

      复水时不得用铜锅或铁锅,以防有离子混入培养基中,影响微生物的生长;容器的大小需大于复水后培养基总体积的2倍以上,避免在加热溶解过程中,培养基溢出;含有琼脂粉的培养基,在加热溶解之前可以浸泡数分钟;加热培养基时?#27426;?#35201;进行搅拌,特别是琼脂类培养基。为避免烧?#36141;?#27832;腾溢出,对于少量的培养基建议使用沸水浴进行加热。烧糊的培养基营养物质被破坏,并可产生有毒物质,如发现焦化,或未溶解均匀前培养基有溢出,该培养基即不能使用,应重新制备。对于琼脂类培养基进行再融化时应使用沸水浴或流动蒸汽进行加热,最多只能加热两次,第二次再融化后仍未用完的培养基应弃去。

    4.灭菌

      一般培养基采用湿热灭菌,即高压蒸汽灭菌,通常是121℃ 15min,含糖或特殊培养基,按?#23637;?#23478;标准或生产商提供的说明灭菌。已配制好的培养基必须立即灭菌,避免微生物生长繁殖而消耗养分,改变培养基的酸碱度。高温可破坏培养基的营养成分,还会使琼脂的凝胶强度下降,因此必须?#32454;?#25511;制灭菌温度和时间,并且不可重复灭菌。高压蒸汽灭菌锅的压力表等要定期进行检定,并定期采用生物指示菌法或化学变色纸片对灭菌效果进行验证。

    5.pH测定

      微生物必须在?#23460;?#30340;pH范围内才能正常生长繁殖或体?#21046;?#29983;物特性。培养基配方要求的pH为灭菌或消毒后的pH值,即培养基使用前的pH,并应在电热恒温培养箱25℃温度下采用精密酸度计进行测量,固体琼脂培养基应以特殊的胶体表面测量电极进行测量。使用过程中,如果需要调整培养基的pH,应用1mol/LNa0H或 lmol/LHCL调整,注意不可反复调pH,否则会影响培养基的渗透压。

    6.配制好的培养基保存

      灭菌以后培养基应该迅速冷却至所需温度,避免长时间保存在灭菌锅内,造成过度灭菌,影响培养基的营养成分或选择性效果。所配制的培养基的量,应该是在最长保存期限内正好使用完。含染料的培养基应?#23637;?#20445;存;?#36141;?#30340;琼脂平板如果配制的当天未使用完,应于低温保存箱冷藏保存,如果保存时间超过2天,应将其放入密封的塑料袋中保存;配好的肉汤类培养基如果保存时间超过2个星期,应将其放在带?#26032;?#26059;盖的试管或其它密闭的试管或容器中防止蒸发。

     

    培养基的?#38405;?#27979;试

     

    1.外观控制

      制备好的培养基应有相应的颜色,一般的培养基应澄清、无浑浊、无沉淀。使用前应检查培养基的颜色是否发生变化,是否蒸发/脱水。

    2.污染控制

      ?#29992;?#25209;制备好的培养基中选取部分进行污染测试(无菌试验),确定无微生物生长方可使用。

    3.?#38405;?#27979;试

    (1)测试菌株选择 测试菌株是具有其代表种的稳定特性并能?#34892;?#35777;明实验室特定培养基最妙?#38405;?#30340;一套菌株,应来自国际/国家标准菌种保藏中心ATCC标准菌株,菌株的选择参考卫生行业标准WS/T232-2002《商业性微生物培养基质量检验规程》。

    (2) 定量测试方法(改良Miles-Misra法) 测试菌株过夜培养物10倍递增稀释;测试平板和参照平板划分为4个区域并标记;从最高稀释度开?#36857;?#20998;别?#25105;坏?#31232;释液于试验平板和对照平板标记好的区域;将稀释?#21644;?#28385;整个1/4区域,37°C培养18小时;对?#20934;?#25968;的区域计数,按公式计算生长率(生长率=待测培养基平板上得到的菌落总数/参考培养基平板上获得的菌落总数)。非选择性培养基上目标菌的生长率应不低于0.7,该类培养基应易于目标菌生长;选择性培养基上目标菌的生长率应不低于0.1。

    (3)半定量测试方法(改进的划线法接种法) 平板分ABCD四区,?#19981;?6条线,平行线大概相隔0.5cm,每条有菌落生长的划线记作1分,每个仅一半的线有菌落生长记作0.5分,没有菌落生长或生长量少于划线的一半记作0分,?#36136;?#21152;起来得到生长指数G。目标菌在培养基上应呈现典型的生长,而非目标菌的生长应部分或完全被抑制,目标菌的生长指数G大于6时,培养基可接受。

    (4)定性测试方法(平板接种观察法) 用接?#21482;?#21462;测试菌培养物,在测试培养基表面划平行直线。按标准中规定的培养时间和温度对接种后的平板进行培养,目标菌应呈?#33267;?#22909;生长,并有典型的菌落外观、大小和形态,非目标菌应是微弱生长或无生长。

     

    培养基的质量是微生物实验室检测工作的基础,事关检测工作的准确性、可靠性,在微生物实验室检测工作中举足轻重。如果在工作中忽视任?#25105;?#20010;?#26041;?#30340;质量问题,都将导致检验结果科学性、客观性的偏离。因此,加强培养基的实验室质量控制,认真地做好培养基的质控工作,?#27426;?#23436;善和提高培养基的质控水平,才能为微生物检测实验室提供高质量的培养基。

    关键词:电热恒温培养箱  

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