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    不同處理組織的方法對提取RNA產量的影響

    提供者:上海遠慕生物科技有限公司   發布時間:2018/9/27  閱讀次數:115次   進入該公司展臺

    實驗方法原理:   

    RNA 提取過程中最應注意的是:組織或細胞在變性液中完全裂解的同時,如何抑 RNase 引起的 RNA 降解問題。在直接加工新鮮組織時,所有的細胞能盡可能快的接觸變性劑以完全裂解這一步是相當重要的。一些難以加工的組織,例如:堅硬的腫瘤、細菌細胞、植物根部等,即使使用勻漿器一般也不能很有效的裂解。此時,通常可以在處理組織時,先對其進行冷凍處理,以使之充分裂解。


    為使迅速冷凍樣品,以使整塊組織徹底冷凍,因此,在冷凍前應先將組織切成小塊,然后將其浸沒于液氮中。這將會使組織塊以最快的方式冷凍。另外,也可將一個金屬盤置于干冰上作為冷凍的表面,以對片狀的組織進行快速的冷凍。

    下面三種力法分別描述用三種不同的方式加工 0.lg 冷凍的小鼠肝臟組織,以產生組織/細胞裂解產物。裂解產物可進行 RNA 的提取純化,或用于估計 pdy(A)+RNA 的產量。雖然這三種方法同是利用胍緩沖液以徹底裂解細胞,但是它們在先前的步驟中,即如何加工組織或是在如何裂解的過程中有所不同。




    實驗步驟    

    方法一: 在勻漿器中加工冷凍的組織

    產量:4.1ugpoly(A)ˉRNA

    冷凍的組織在干冰上被切成大約 Cl5 cm2 的小片,轉人勻漿器中,一邊緩緩加入裂解緩沖液一邊不斷的勻漿。

    方法二:通過注射器加工冷凍的組織。

    產量:3.2ugpoly(A)-RNA。

    冷凍的組織在干冰被切成大約 0.5 cm2 的小片,一邊緩緩加人裂解緩沖液一邊通過 18 號的標準注射針頭反復抽打十次。

    方法三:在液氮中將組織研磨成粉末。

    產量:7.1ugpoly(A)ˉRNA。

    將冷凍的樣品放在研缽中進行劇烈研磨以使其粉碎。當組織被磨成粉狀后,向研缽中加人變忭緩沖液,并攪拌均勻。混合物融化后應轉移到合適的容器中進行進一步的操作。在液氮中研磨組織至粉末狀,細胞的裂解則更完全,因此能得到比前兩種方法多近一倍的產量。

    可見,即使對于 N—種組織,采用同一種試劑進行 RNA 的提取,僅僅由于組織樣品處理方法的不同,就導致了 RNA 提取量的顯著差異。因此,在對不同的組織進行 RNA 提取時,不僅要選擇最合適的提取方法,同時也要根據所處理的組織,以及提取目的以選擇最為合適的組織處理方法,只有這樣才能獲得最佳效果。

    關鍵詞:提取RNA    

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