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    人胰岛素定量ELISA检测试剂盒产品介绍

    提供者:泉州市睿信生物科技有限公司   发布时间:2018/9/4  阅读次数:472次   进入该公司展台

    【产品名称】

    通用名称:人胰岛素定量ELISA检测试剂盒

    【包装规格】96人份/盒

    【预期用途】仅供科研使用,定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中PRLR的浓度。

    【检验原理】本试剂盒采用双抗体?#34892;?#37238;联免疫吸附检测技术。特异性抗人/犬/猪Insulin 单克隆抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本和生物素化的检测抗体,经过孵育,样本?#20889;?#22312;的Insulin 与固相抗体和检测抗体结合。洗涤去除未结合的物质后,加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(streptavidin-HRP)。洗涤后,加入显色底物TMB,避光显色。颜色反应的深浅与样本中Insulin 的浓度成正比。加入终止液终止反应,在450 nm 波长(参考波长570 - 630 nm)测定吸光度值。【主要组成成分】

    主要成分

    组分

    规格

    数量

    包被微?#35013;?/span>

    96T

    1

    标准品

    500pg/mL

    2

    抗体

    80uL

    1

    辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素

    150uL

    1

    10×检测缓冲液

    5mL

    1

    标准品稀释液

    5mL

    1

    TMB显色液

    10mL

    1

    TMB终止液

    10mL

    1

    洗涤缓冲液(20X)

    30ml

    1

    封板膜

     

    4

    注意:使用前请检查试剂盒中试剂的标签和数量与表格是否一致

    【样本要求】

      样本类型和采集

    细胞培养上清 :300 g 离心 10 分钟去除沉淀物,即刻检测, 或者分装,-20℃以下贮存。

    血清样本:分离管分离血清。在 1000 g 离心之前,使血样凝集 30 分钟。吸取血清样本之后即刻检测,或 者分装,-20℃以下贮存。

    血浆样本:EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝收集血浆样本。1000 g 离心 3 0 分钟收集样本。即刻检测,或者 分装,-20℃以下贮存。 本试剂盒可能适用于其它生物学样本。细胞培养上清、血清和血浆已经过验证。

    注意:检测前,样本中可见的沉淀必须去除。不要使用严重溶血或高血脂的样本。 样本应分装并贮存于-20,?#21592;?#20813;人IL-6活性的丢失。如果在 24 小时内检测,样本可以 存放在 2 - 8 避免样本的反复冻融。在检测前,冷冻样本应该缓慢地?#25351;?#33267;室温,轻柔地混?#21462;?/b>

    样本保存和稳定性

    样本在2-8℃条件下,可以储存72h,或者在- 20℃储存6个?#38534;?#26679;本收集后,不是一次检测完,请按一次用量分装冻存,避免反复冻融,使用时在室温下解冻,确保样品均匀充分解冻。

    【检验方法】

    试剂准备

    检测前请将所有的试剂、样本?#25351;?#33267;室?#38534;?如果浓缩的试剂出现结晶,37℃温浴,直至结晶全部溶解。

    洗液

    吸取 20×浓缩洗液 30 ml 至 1 L 的量筒,加蒸馏水或去离子水至600 ml,轻轻混匀,避免泡 沫。 转移至干净瓶内。2 - 25℃贮存,1×洗液可稳定 30 天。

    检测缓冲液

    吸取 10×浓缩检测缓冲液 5 ml 至 100 ml 量筒,加蒸馏水或去离子水至 50 ml,轻轻混匀,避 免泡沫。 2 - 8℃贮存,1×检测缓冲液可稳定保存 30 天。

    检测抗体 

    稀释前充分混?#21462;?#26681;据标准品和待测样本的数量,用 1×检测缓冲液按 1:100 稀释浓缩的检 测抗体。 注意:请在 30 分钟内使用稀释后的检测抗体。

    辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素

    稀释前充分混?#21462;?根据标准品和待测样本的数量,用 1×检测缓冲液按 1:100 稀释浓缩的辣根过氧化物酶标记的 链霉亲和素。 注意:请在 30 分钟内使用稀释后的辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素。

    样本稀释

    如果样本需要稀释,请用试剂盒提供的 1×检测缓冲液稀释血清/血浆样本,用细胞培养基稀释 细胞培养上清。

    人胰岛素标准品

    用蒸馏水或去离子水重溶人胰岛素标准品,重溶体积标注在人胰岛素标准品的标签上。轻柔 地?#34892;?#38663;荡,确保充分混匀,重溶后标准品的浓度为4000 pg/ml。重溶后静置 10 - 30 分钟。稀释 前充分混?#21462;?请使用聚丙烯管进行标准品稀释。

    标准曲线制作血清/血浆样本标准曲线的制作:

    取 250 μl 浓缩的人胰岛素标准品,加入 250 μl 标准品稀释液,作为标准曲线的最高浓度 (2000 pg/ml)。在每一个试管中加入 250 μl 标准品稀释液。使用高浓度标准品做 1:1 系列稀释。每?#25105;?液时,请确保充分混?#21462;R员?#20934;品稀释液作为标准曲线的零浓度。

    细胞培养上清样本标准曲线的制作:

    取 250 μl 浓缩的人胰岛素标准品,加入 250 μl 细胞培养基,作为标准曲线的最高浓度 (2000 pg/ml)。在每一个试管中加入 250 μl 细胞培养基。使用高浓度标准品做 1:1 系列稀释。每?#25105;?#28082; 时,确保充分混?#21462;?#20197;细胞培养基作为标准曲线的零

    【检测步骤】

    检测之前请将所有的试剂、样本平衡至室?#38534;?/p>

    1. 准备好所?#34892;?#35201;的试剂及工作浓度标准品。

    2. 将不需要的板条拆卸下来,放回装有干燥剂的铝箔袋,重新封好封口。

    3. 加入300 μl 1×洗液静置浸泡30 秒。为了获得理想的实验结果浸泡是必须的。弃掉洗液之后,在吸水纸上将微?#35013;?#25293;干。洗板完成之后,请立即使用微?#35013;澹?#19981;要让微?#35013;?#24178;燥。

    4. 复孔加入100 μl 2 倍倍比稀释的标准品。空白孔复孔加入100 μl 标准品稀释液。

    5. 样本孔加入50 μl 1×检测缓冲液和50 μl 样本。

    6. 每孔加入50 μl 稀释的检测抗体。保证步骤4、5、6 连续加样,不要间?#31232;?#21152;样过程在15 分钟内完成。

    7. 使用封板膜封板。300 转/分钟振荡,室温孵育1.5 小时。

    8. 弃掉液体,每孔加入300 μl 洗液洗板,洗涤6 次。每次洗板,在吸水纸上拍干。为获得理想的实验?#38405;埽?#24517;须彻底移除残留液体。

    9. 每孔加入100 μl 稀释的辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素。

    10. 使用新的封板膜封板。300 转/分钟振荡,室温孵育30 分钟。

    11. 重复步骤8。

    12. 每孔加入100 μl 显色底物TMB,避光,室温孵育5 - 30 分钟。

    13. 每孔加入100 μl 终止液。颜色由蓝色变为黄色。如果颜色呈?#33268;?#33394;或者颜色的变化明显不均匀,请轻轻叩击板框,充分混?#21462;?/p>

    14. 在30 分钟之内,使用酶标仪进行双波长检测,测定450 nm 最大吸收波长和570 nm 或630 nm参考波长下的OD 值。校准后的OD 值为450 nm 的测定值减去570 nm 或630nm 的测定值。仅使用450 nm 测定会导致OD 值偏高,并且准确度降低。

    【结果计算】

    计算标准品和样本的平均OD 值,然后减去零浓度标准品的OD 值。?#21592;?#20934;品浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,用计算机软件进行回归拟合生成标准曲线。回归分析确定最佳拟合曲线。通过对浓度?#23707;蚈D 值取对数拟合,可以?#21592;?#20934;曲线进行线性化。此过程可能可以得到更多样本的浓度,但数据的准确度会降低一些。

    注意:标准曲线最高浓度点的终浓度为500 pmol/ml。如果完全按照说明书的步骤作 (50 μl

    样本 + 50 μl 检测缓冲液),计算样本浓度时请乘以稀释因子2。如果样本按照说明书进行了稀释,最终的稀释倍数为2。如果样本进行了其它方式的稀释,计算样本浓度时请乘以相应的稀释倍数。

    【检验方法的局限性】

    1、仅供科研使用,不得用于临床诊?#31232;?/p>

    2、在试剂盒标示的?#34892;?#26399;内使用,过期产品不得使用。

    3、跟其他厂家的试剂盒或者组分不能混用。

    4、使用试剂盒配套的样品稀释液。

    5、如果样本值高于最高标准品浓度值,请将样本适当稀释后,再重新测定。

    6、待测样本?#20889;?#22312;的人抗鼠等异嗜抗体会干扰检测结果,检测前,请排除该因素。

    7、通过其他方法得到的检测结果,与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性。

    【产品?#38405;?#25351;标】

    1、物理?#38405;?/p>

    试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微?#35013;?#38109;箔袋应真空包装,无破损漏气。

    2、剂量反应曲线线性

    校准品剂量反应曲线相关系数r值,大于等于0.9900。

    3、精密度

    批内精密度:三组已知的高、中、低浓度样品,进行二十次在同一个板块内精度评估。批内变异系数CV%小于10%。

    批间精密度:三组已知的高、中、低浓度样品,进行二十次在不同板块内精度评估。批间变异系数CV%小于15%。

    4、检测范围

    7.81pg/ml→500pg/ml

    5、灵敏度

    最低检出剂量小于0.35pg/mL。

    6、回收率

    三组已知的高、中、低浓度样品,进行五?#20301;?#25910;率评估,回收?#35797;?5%-115%之间。

    7、特异性

    本试剂盒识别天然和重组人胰岛素,与结构类似物无交叉。

    8、稳定性

    2℃-8℃保存,?#34892;?#26399;6个?#38534;?/p>

    关键词:胰岛素检测  

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    ?#35753;?#26631;签

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