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    人淀粉样前体蛋白酶联免疫分析试剂盒实验原理

    • 所属分类:考试资料

      上传时间:2017/10/12

    • 文件类型:jpg

      文件大小:64 KB

    • 浏?#26469;?#25968;:2659次

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    • 上传公司:上海谷研生物科?#21152;?#38480;公司进入展台
    • 标签:试剂盒  

    资料简介

    人淀粉样前体蛋白酶联免疫分析试剂盒检测范围:96T
    0.1ng/ml - 45ng/ml
    使用目的:
    本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中淀粉样前体蛋白(APP)含量。
    实验原理
    本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人淀粉样前体蛋白(APP)水平。用纯化的人淀粉样前体蛋白(APP)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中?#26469;?#21152;入淀粉样前体蛋白(APP),再与HRP标记的淀粉样前体蛋白(APP)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样?#20998;?#30340;淀粉样前体蛋白(APP)?#25910;?#30456;关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标?#35760;?#32447;计算样?#20998;?#20154;淀粉样前体蛋白(APP)浓度。
    试剂盒组成

    人淀粉样前体蛋白酶联免疫分析试剂盒标本要求
    1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
    2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
    操作步骤
    1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下?#22411;?#34920;在小试管中进行稀释。


    2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混?#21462;?br />3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
    4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
    5.洗涤?#30418;?#24515;揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
    6.加酶?#22909;?#23380;加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
    7.温育:操作同3。
    8.洗涤:操作同5。
    9.显色?#22909;?#23380;先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.
    10.终止?#22909;?#23380;加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
    11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进?#23567;?br />操作程序总结:

    计算
    ?#21592;?#20934;物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标?#35760;?#32447;,根据样品的OD?#28068;?#26631;?#35760;?#32447;查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标?#35760;?#32447;的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
    注意事项
    1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
    2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
    3.各步加样均应使用加样器,并经常校?#20113;?#20934;确性,?#21592;?#20813;试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
    4.请每次测定的同时做标?#35760;?#32447;,最好做?#32431;住?#22914;标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释?#21512;?#37322;?#27426;?#20493;数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
    5.封板膜只限一次性使用,?#21592;?#20813;交叉污?#23613;?br />6.底物请避光保存。
    7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
    8.所有样品,洗涤液和各种废弃物?#21152;?#25353;传染物处理。
    9.本试剂不同批号组分不得混用。
    人淀粉样前体蛋白酶联免疫分析试剂盒保存条件及有效期
    1.试剂盒保存?#28023;?-8℃。
    2.有效期:6个月

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